【蛋白質翻譯后修飾（PTM）】

蛋白質翻譯后修飾（PTM）是調節蛋白質生物學功能的關鍵步驟之一，是蛋白質動態反應和相互作用的一個重要分子基礎，同時，它也是細胞信號網絡調控的重要靶點。隨著基于質譜的蛋白質組學技術的發展與成熟，研究發現在原核生物中也存在大量類似于真核生物的復雜多樣的PTM產物。

作為一種增加蛋白質組復雜度的手段，PTM主要是通過功能基團或蛋白質的共價添加、調節亞基的蛋白水解切割或整個蛋白質的降解等方式增加蛋白質組的功能多樣性。經修飾的蛋白呈現結構、活性以及穩定性的改變，從而影響蛋白質的空間構象、亞細胞定位以及與其它細胞分子的相互作用。

迄今，多達上百種蛋白質翻譯后修飾被發現。近年來，結核分枝桿菌中的PTM現象也被大量發現并研究（見表1），包括：PTM現象在結核分枝桿菌的毒力變化以及感染免疫中的作用；PTM直接（作為免疫原表位的結構基團）或間接（介入真核生物固有免疫受體信號通路或抗原處理加工途徑等）調節結核分枝桿菌的免疫蛋白質組；有無PTM的結核分枝桿菌T細胞抗原表位庫的無偏檢測與鑒定技術等等。

表1 結核分枝桿菌蛋白質組翻譯后修飾類型

 

【恥垢分枝桿菌表達系統】

目前，大多數研究采用大腸桿菌表達分枝桿菌蛋白，但結果表明，在該宿主中的分枝桿菌蛋白表達情況不理想。考慮到物種之間的遺傳背景差異性，真實還原結核分枝桿菌的目的蛋白表達、合成以及修飾狀態，構建結核分枝桿菌的目的蛋白表達菌株是重要的研究基礎。由于結核分枝桿菌的目的蛋白表達純化難度大，因此常用其同源菌株恥垢分枝桿菌作為蛋白表達宿主。恥垢分枝桿菌相較于結核分枝桿菌具有安全性較高及生長速度快等特點，因此對野生型恥垢分枝桿菌的遺傳改造有益于表達結核分枝桿菌蛋白。

由于C端含有多個連續組氨酸（His）的恥垢分枝桿菌GroL2蛋白的表達使得帶有His標簽的分枝桿菌蛋白純化變得非常困難（見圖1），通過遺傳工程手段敲除該基因可以有效地解決這一問題。

晶諾生物現已通過噬菌體介導的同源重組法將恥垢分枝桿菌的msmeg1583（GroL2）基因敲除，獲得M. smegmatis mcc155 Δmsmeg1583菌株，并利用該菌株成功表達純化EGFP、EchA6（Rv0905）蛋白（見圖2，表2）。

圖 1 野生型恥垢分枝桿菌表達蛋白純化圖

圖 2?M. smegmatis?mcc155 Δmsmeg1583表達蛋白純化圖

 

表 2? 純化后EchA6（Rv0905）蛋白質譜鑒定

 

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產品名稱：恥垢分枝桿菌表達系統

規格：1套

貨號：GOMY8001

產品說明：套裝由MSΔmsmeg_1583 ::(sacB hygB)甘油菌和pMV261-tet on質粒組成。把MSΔmsmeg_1583 ::(sacB hygB)制備成電轉感受態細胞，潮霉素抗性（Hyg+），搭配pMV261-tet on質粒用于表達、純化相關蛋白。

特點：在7H10固體培養基（含有電轉質粒相應的抗生素）上培養3-5天可見單克隆。

存貯方式：-80℃保存，甘油菌注意定期復蘇保菌。

 

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