技術原理與實驗步驟
基因定點突變指在基因核苷酸序列特定位點插入或缺失核苷酸，是蛋白功能改造的常用方法。目前基因定點突變的方法主要有PCR介導的定點突變、寡核苷酸引物介導的定點突變、盒式突變等。
PCR介導的定點突變技術原理是根據突變位點設計4條引物，其中兩條引物帶有突變位點，后通過3步PCR后即可得到帶有突變位點的目的DNA片段。具有周期短、成功率高、不受酶切位點限制等優點，是目前使用最普遍的定點突變方法。
寡核苷酸引物介導的定點突變原理是將待突變基因克隆到質粒載體上，在突變位點設計引物，提取插入了目的基因片段的質粒并制備成單鏈DNA，用突變引物做高保真PCR產生野生型、突變型的同源雙鏈DNA分子，這些DNA分子含有nick位點，轉化到感受態細胞后可經大腸桿菌修復。由于野生型質粒一般來源于大腸桿菌，被甲基化修飾，會被DpnI酶切，經DpnI處理后選擇性的保留了突變型質粒，轉化到感受態細胞后可得到含有突變質粒的克隆，可用于DNA進行點突變、插入及缺失突變。
服務流程
- 客戶提供基因信息、載體信息及要引入突變的位置等
- 設計引物并進行PCR，PCR產物連接到載體上，挑取菌落，提取質粒并測序
- 發送產品：構建好的陽性克隆子菌液、質粒，附帶相關引物、PCR電泳圖、測序結果等
服務周期：1-2周
