技術原理與實驗步驟
將目的基因片段連接至合適的原核表達載體后，轉化到大腸桿菌BL21（DE3）菌株內，隨后利用菌自身的蛋白表達系統通過溫度和誘導劑的控制，誘導其在宿主菌內表達目的蛋白質，將表達樣品進行SDS-PAGE 以檢測表達蛋白質。原核表達系統是至今為止最為成熟可靠的蛋白表達系統，其優點是實驗周期短、成本低、產量高。
優勢
隊伍專業，熟練掌握密碼子優化、載體構建、等電點分析、表達純化、包涵體變性復性等操作，在蛋白表達純化及發酵生產實戰經驗豐富；儀器完備，擁有蛋白純化所需的離子柱、分子篩、親和柱、疏水柱、AKTA purifier系統。
密碼子優化
根據原核細胞蛋白表達密碼子偏好進行密碼子優化，完善蛋白表達，解決蛋白無法表達及包涵體蛋白等問題。
原核表達
構建原核表達質粒，轉化到BL21感受態細胞，IPTG誘導表達。
包涵體變性復性
蛋白在原核細胞中表達后，有時無法分泌到細胞質中，而是以包涵體的形式存在，無法從上清中獲取，需收集包涵體，對包涵體進行變性復性，獲取目的蛋白。
純化
蛋白表達純化專業人員，對研究蛋白進行等電點分析、疏水性分析等，豐富的經驗，熟練的隊伍，快速優質的純化蛋白。
內毒素檢測及去除
內毒素是菌體破裂后產生的毒素，主要成分是類脂質A，會引發人體發熱、休克、白細胞反應等免疫反應，對于藥用蛋白產品，需將內毒素清除，否則會引發安全問題。
服務流程
- 依據客戶提供的蛋白基因、載體要求，設計克隆方案，構建原核表達載體。可提供6xHis、GST、MBP等攜帶標簽及腸激酶、凝血酶等蛋白酶切除標簽蛋白的表達載體，提供多種選擇；
- 將構建好的質粒轉化到大腸桿菌BL21（DE3）菌株內，優化溫度、IPTG濃度等條件誘導蛋白表達，SDS-PAGE驗證；
- 對蛋白性質進行分析，選擇合適的方法分離純化蛋白；
- 依據客戶要求如蛋白純度、是否需要帶標簽、帶何種類型的標簽、蛋白溶解緩沖液要求，是否凍干等提供最終蛋白產品，附加載體構建報告、SDS-PAGE檢測報告、目的基因質粒、重組細菌菌株、重組表達菌株等信息。
