技術原理與實驗步驟

穩轉細胞株構建一般是通過慢病毒方法構建的。構建慢病毒包裝需要的表達質粒及包裝質粒，用轉染試劑將質粒轉染到293T等病毒包裝細胞中可完成病毒包裝。包裝好的慢病毒感染細胞后，會將目的表達基因整合到細胞基因組中，實現穩定表達，通過表達載體上的篩選基因如熒光、抗生素等可實現陽性細胞篩選。本公司擁有熒光蛋白Venus、mCherry、mKate、GFP、EYFP等質粒，運用慢病毒包裝系統包裝慢病毒，感染CHO、Hela、客戶需求細胞，可構建用于檢測基因表達、蛋白定位相關的熒光蛋白融合細胞株。

參考文獻

Monitoring G protein-coupled receptor activation using an adenovirus-based b-arrestin bimolecular fluorescence Q1 complementation assay. Analytical Biochemistry, 2013.

服務流程

1. 客戶提供基因信息及需求；
2. 選擇合適的表達質粒載體，合適的熒光蛋白，合理的熒光蛋白拆分位點，分子克隆構建質粒；
3. 構建成功的表達質粒與包裝質粒共轉染293T細胞；
4. 收集病毒，熒光細胞計數法測定病毒滴度；
5. 病毒感染CHO、Hela或客戶需求細胞，熒光檢測并用流式細胞儀分選；
6. 根據客戶對穩轉細胞株的要求如體積、細胞數等提供細胞株，附加質粒構建引物、測序結果、細胞熒光檢測、流式細胞儀分選結果等信息。